微生物培訓計劃及記錄

㈠ 誰給我寫個去醫院檢驗科及住院部，生化科。微生物科進修學習計劃書啊 高分 求寫

如果半年的話；應該微生物科3個月，生化1個月，免疫1個月，臨檢1個月。

㈡ ．進行微生物的培養與觀察時怎樣記錄結果

記錄菌落的特徵，包括形狀、大小、顏色等。

㈢ 做微生物實驗的步驟

1、准備工作，培養基的配製及滅菌（121-126度滅30分鍾高壓蒸汽式滅菌），玻璃器皿的滅菌（170度滅2小時乾熱滅菌，也可用濕熱滅菌）若量大可加長滅菌時間。

㈣ 微生物實驗室管理制度

USP葯典 《1117》章節就是這個：

良好的微生物實驗室操作規范
簡介
在微生物實驗室中，良好的實驗室操作規范是基於很多原則，包括以下活動：無菌技術、培養基的控制、菌種的制備、儀器設備的管理、細致的記錄和數據的評估、人員的培訓。眾所周知，微生物測定數據的可變性、可靠性和重現性是基於公認方法的使用和堅持良好的實驗室操作規范。
培養基的制備和質量控制－培養基的制備
培養基是微生物測定的基礎，培養基的質量因而成了保證微生物實驗成功的關鍵。培養基的制備、合理的貯存、培養基的質量檢驗，能確保提供持續高質量的培養基。在按照可接受的來源和標准中的配方制備培養基的過程中，重要的是選擇正確的培養基和成分。與脫水和制備好的培養基一起的還常常伴有供應商的配方和說明。因為不同的培養基可能有不同的制備要求（如：加熱、填加物、
ph值的調節等），按照說明確保制備可接受的培養基是重要的。一份描述效期和建議貯存條件的COA是同制備好的培養基一起的，同時附有用於培養基的促生長試驗和靈敏度測試的菌種。
水普遍用於微生物培養基的稀釋。純化水是最常用的，但是在有些情況下，也用去離子水和蒸餾水。稀釋用水的體積應該記錄。
使用脫水培養基和培養基組分來制備培養基時要准確稱量。使用己校正的具有適合的稱量范圍的天平。使用清潔的容器和工具，防止配方中帶入外來物質，改變培養基的最終組成。稱量也應該記錄。
脫水培養基先在水中分散，並完全溶解和滅菌。如果必要可以加熱使溶解,但要防止過度加熱，因為所有的培養基或多或少有對熱敏感的。用於培養基制備的設備應適於加熱控制，持續攪拌，溶質混合。培養基變黑（梅特拉反應和非酶的棕色著色劑）通常顯示過度加熱。當需要向培養基中添加補充物時，添加後應充分混合。
制備好的培養基應放在清潔無菌的玻璃器具中，也可以加入抑制性物質。抑制性物質可以由器具清潔時產生也可由先前貯存在此器具的物質產生。必須確保清潔過程能有效去除殘留和異物，確保清潔劑用純化水充分清洗。參見《1051玻璃器具的清洗》。
培養基的滅菌應根據供應商提供的參數或用戶自己的驗證。買來的制備好的培養基應提供其使用的滅菌方法的文件。理想的供應商應提供培養基的滅菌保證水平（SAL），此水平是依靠公認的生物指示劑確定的。濕熱高壓滅菌是首選的滅菌技術，除了一些為避免培養基中的熱敏物質遭到破壞而採用的煮沸方法。通過過濾滅菌對有些配方也是合適的。
培養基的滅菌方法、滅菌條件的效果應通過培養基的滅菌和促生長試驗來驗證。另外，如果通過濕熱滅菌，滅菌周期應經過驗證，對選擇合適的負載和體積來確保合適的熱分布。通常供應商建議採用一個已校正過的滅菌高壓鍋，在121°滅菌15分鍾。通常指培養基達到溫度的時間。當滅菌鍋負載結構影響加熱的速度是時，越多的負載就需要越長的滅菌周期。然而，滅菌的時間取決於培養基的體積和高壓鍋的負載。滅菌周期中，當溫度是慢慢上升時，可能導致培養基的過度加熱。因此，必須仔細確認能達到最小的SAL要求的滅菌周期，在過度加熱時，抑制培養基降解的趨勢。在流體循環完成後，不主張放冷後的培養基中放在滅菌鍋中貯存，因為這樣可能破壞培養基。不合適的加熱或滅菌（對買來的培養基或是內部制備的培養基）可能導致顏色的不同變化，不透明，改變培養基的規格，或是PH發生漂移（與供應商的提議范圍）。
通過無菌技術為測試制備的每一批培養基其PH在放冷至室溫（25°）後，都應測定。一個扁平的pH計用於培養基表面pH值的測定，浸入式的pH計用於液體的測定。各供應商提供的培養基的pH應該在規定的±0.2的范圍內，除非通過驗證得到更寬的范圍。
制備培養基應對培養皿和試管進行適當如下的檢查：
有裂紋的容器和蓋子；
容器內不同的填充體積；
有裂紋容器內可導致脫水的結果或是固體培養基表面起皺；
溶血；
額外黑或顏色改變；
可能過冷引起的結晶；
過量的氣泡；
微生物的污染；
氧化顯示的情況；
批號、效期的檢查和記錄；
培養基的滅菌。
培養基的貯存
在培養基銷售給最終的使用者之前，供應商和生產商是如何運輸和貯存培養基應謹慎考慮。生產商在運輸和貯存培養基時，應使用那些能盡可能減少失水，溫度控制，機械保護裝置的條件。
培養基的標識應包括批號、制備，有效期和證書。培養基應根據供應商的說明書貯存。實驗室制備的培養基應根據驗證的條件貯存。不能將培養基貯存在零度以下，因為太冷的條件下會破壞培養基的結構。保護培養基避免在光照和過高的溫度下保存。培養基若要延長貯存，應將培養皿放在密封包裝或容器中避免水分流失。
制備的固體培養基在初始容器中的再熔化，只能熔化一次，避免因過度加熱和潛在污染影響培養基的質量。推薦採用加熱水浴或蒸氣加熱來熔化培養基。微波爐和加熱板經常使用，但是要小心，避免過度加熱破壞培養基，避免實驗室人員受到玻璃的碎片和燒傷的危險。熔化的培養基應在45°至50°保存不超過8小時。當從浸在水浴中的培養基容器中傾倒時，要小心操作防止水浴產生的水與己滅菌的培養基混合。在傾倒前將容器外表面擦乾是明智的。
處理使用過的培養基和過期的培養基應遵守當地的微生物危害安全操作。
質量控制測試
生長培養基可以在實驗室中由單獨的成分來制備，很多實驗室因為他們的使用情況，使用脫水培養基或購買商業化的制備好的裝在平皿或玻璃容器中的培養基。生產者企圖標准化制備來源於生物的培養基的原料，但是必須經常不可避免的處理這些從生物來源得到的原料的不同，因而批與批之間的不同必須考慮。實驗室制備的或是供應商提供的培養基的性能更多的是依靠其制備過程。不適當的培養基的制備對微生物的生長、復壯能引起令人不滿意的結果並導致可疑結果。
應對所有的制備培養基進行質量控制測試。工廠內制備的培養基的常規質量測試包括pH、促生長試驗和為確定有效期的定期的穩定性測試。

當工廠內制備的微生物培養基是採用適當的制備和已驗證過滅菌方法，促生長試驗可以僅限於購入的脫水培養基，除非相關葯典方法另有說明。如果培養基的制備沒有經過驗證，每一批的培養基都要進行促生長試驗。測試的微生物應根據合適的葯典方法選擇，或基於供應商的對特殊的培養基的提議，或基於典型的環境中微生物。
培養基的有效期能支持促生長試驗顯示其性能，滿足可接受的標准至到或包括有效期。每一批培養基的貨架壽命將依據規定條件組分和配方的穩定性和容器和密封件的型號。
當一批培養基不能滿足促生長試驗的要求時，應該啟動調查，找到原因。調查應包括糾正措施來防止問題的再發生。如果未找到可指認的原因或關於不生長糾正決定是不確定的，則問題批不能使用。
用於診斷目的的試劑，如支持微生物鑒定用的革蘭氏染色和氧化酶測試。其擁有的特性與微生物的培養基在質量控制測試中是相似的。根據供應商的說明，選擇正確的質量控制用標准微生物進行測試優先於未知樣品的診斷測試。
在環境監測中用到的培養基應特別小心。用於關鍵區域環境監測的培養基更適合雙層打包，並最終滅菌。如果關鍵區域用培養基沒有最終滅菌，應進行預培養，並在使用前進行100％檢查。防止帶入的外來的污染，並防止假陽性。用於表面接觸皿的表面凸起培養基應被驗證。
微生物菌種的維護
生物樣本是最靈敏(delicate)的,因為他們生存能力和特性是依賴於適當的處理和貯存。菌種的處理和貯存的標準是使用者的實驗室制定的，採用減少污染的機會和減少生長特性變更。小心一致的處理貯存用菌種是微生物測試結果一致性的重要因素。按葯典方法方法使用的菌種應該取自國家菌種保藏中心。可以包括冷凍的、凍乾的、斜面培養的或是馬上使用的形式。在質量控制測試使用前應進行菌種純度的確定和菌種的鑒別。馬上使用的菌種要求確定純度、鑒別、接種體大小。鑒定的確認，對通常用的實驗室菌種，理想的是進行基因水平的分析（如：使用合適的經過驗證的探針進行DNA指紋,RNA基因排序,PCR光電導繼電器）
菌種的制備和復壯應該參照供應商的說明書或採用己驗證批準的方法。種子批技術被推薦用於貯備用菌種的保存。
從國家菌種保藏中心得到的初始菌種在合適的培養基被復壯、培養。部分的貯備菌種（第一次接種或是傳代）是懸浮在抗冷凍培養基中，分裝至小瓶中，在零下30°或更低的溫度下冷凍，直到使用。如果冷凍在零下70°，或是凍干形式，菌種可以持續的保存。這些冷凍的貯存菌種可以每月或每周接種用作工作菌種。一旦打開，制備了工作懸浮液，不能再冷凍。不能用的部分應該丟棄，以減少繁殖能力損失帶來的風險和貯存污染帶來的風險。
工作用菌種的接種量應該記錄，以防止過量接種增加表型變種。一代的定義是從具有繁殖能力的菌種接種微生物到一新鮮制備的具有促微生物生長能力和培養基中。任何形式的接種都被當做是一次轉移傳代。
實驗室儀器的維護
多數的儀器（培養箱、水浴、滅菌鍋）必須遵從標准驗證程序包括安裝確認、操作確認和性能確認。另外還要求有定期的校驗（通常每年一次）。新的設備，實驗室關鍵的，應該根據QCU 批準的方案進行確認。
用於微生物實驗室儀器（如：pH計和分光光度計）應按規定的進度表進行定期的校驗和測試，以保證其性能。校驗的頻率和性能的確認是基於儀器的型號的不同和能產生實驗室數據的設備的重要程度的不同。
實驗室的布局和操作
實驗室的布局和設計應考慮良好的微生物操作和安全。本質是最大程度的減少微生物菌種的交叉污染，微生物樣本的處理環境也是重要，因為環境也能引起也污染的可能。
一般情況下，實驗室應分成潔凈區、無菌區和陽性室。如果可能，處理和培養滅菌產品的周圍的環境區域應與陽性區完全分離。但是要將陽性和潔凈區完全分開是不可能的，那麼有必要採取隔離和無菌操作來減少可能的意外污染。這些隔離包括：防護衣、清潔、消毒程序和僅用於潔凈無菌的生物安全櫃。對於活的菌種引起的溢出和災禍的程序應放在現場，所有相關技術人員進行上述方法的培訓。
部分樣品會出現微生物的生長，要求進一步分析來確定污染源。當發現有菌生長，樣品應從潔凈區立即轉入陽性區。接種，著色、菌種鑒定或其它的調查操作應在實驗室的陽性室操作。如果可能，發現有菌落生長的樣品在實驗室的潔凈區是不能被打開的。小心隔離污染的樣品和原料將減少假陽性結果。
正在進行取樣操作活動的人員不能進入陽性室或在陽性室操作處理除非特別小心，包括穿防護服和手套，退出後仔細清凈手。理想狀態，受權人員進行樣品取樣操作時，特別是無菌過程的，不能在陽性操作室附近工作。同樣，所有微生物樣品都應採用無菌取樣技術，包括非無菌樣品的取樣。如果可能，在規定的完全無菌的條件的取樣區域進行操作。
要重點考慮的是樣品的污染，它能導致假陽性的出現，除非在過程中特別注意無菌操作。取樣間應設計好，這要原料和輔料的取樣就可以在受控條件下進行，包括無菌衣和無菌取樣設備。對於公用系統的取樣，如水系統，在完全無菌的條件下是不太可能的；然而，當樣品未採用無菌技術取樣時應有記錄，其可靠性不可避免的下降。
環境監測的取樣方法要求對取樣的設備（負載或未負載）進行最小化的無菌處理。如果可能，在對取樣環境進行取樣時，取樣的設備應同時配備培養基，。
實驗室中所有的測試，對關鍵的測試操作，如：最終劑型的無菌測試，散裝產品，生物產品用菌種培養，或是生物產品用細胞培養都應在受控的條件下進行，隔離技術也是可以採用的，無菌的微生物測試。己在顯示，隔離技術比人為的潔凈區域具有更低的環境污染水平，因此，更能減少假陽性結果的產生。隔離系統的驗證是重要的，既能保證環境的完整又能防止假陰性結果的產生，假陰性的結果是由化學消毒物質帶入。
人員的培訓
從事葯品生產所有階段的每一個人員應進行教育，培訓，工作經驗。微生物測試的要求，對人員，主管，經理的核心教育背景應是微生物專業或是與生物學相關的專業。同時有職責保持技能和經驗水平。
操作程序的連貫性在微生物實驗室中是必要。這些程序在培訓程序中提供了二個目地。第一，這些SOPS描述了一種方法論，微生物學家按照這些SOPS能得到准確的和可重復的結果，同時也能得到培訓的基礎。第二，通過跟蹤這些程序，微生物專家能證明其熟練程度，程序的編號或是標題也能提供鑒別，微生物學家獲得的與其工作職責相關的專門培訓。
應對每個人員建立與其工作職責相關的培訓課程。在具有微生物測試資質之前，不能獨立進行相關操作。培訓記錄應當場記錄，在專門的SOP版本中，應有微生物學家的培訓證明。
階段的性能評估在數據記錄中是比較明智的。這些性能測試證明了在微生物實驗室操作的資質，如衛生，鋪平皿，無菌技術，文檔和其它微生物學家提意的。
微生物學傢具有監管和管理的職責，應具備適當的教育廠內監管技能的培訓，實驗室安全，進程，實驗室調查，寫技術報告，相關SOP，和其它與公司流程相關的關鍵方面如實驗室管理職能中提到的。
記錄
記錄應能充分證明測試是在實驗室中通過受控的方法完成的。這包括，但不僅限於以下：
微生物培訓和熟練程度的確認；
設備的驗證，校驗和維護；
測試中的性能（如24小時至7天的流程記錄）；
培養基的制備，無菌檢查，促生長試驗和選擇能力；
培養基的目錄和控制測試；
關鍵組分的測試應按規定的程序執行；
數據和計算的復核；
報告的復核由QCU或有責任的經理）；
偏差的調查；
實驗室記錄的維護
合適的數據記錄和研究對成功的微生物實驗室是重要的。最重要的原則是按照SOP規定操作，SOP應是書面化的，並能反映測試的實際操作是如何進行的，實驗室筆記本應能提供所有詳細的記錄，並保證記錄的完整。實驗室書寫至少應包括以下內容：
日期；
測試物料
微生物測試人員名稱
操作程序的號碼
記錄測試的結果
偏差
參數的記錄（使用的設備，使用微生物菌種，培養基的批號）
管理員，第二個復核人簽名
每一台關鍵儀器的使用都應在台帳上記錄，所有都應根據SOP的要求記錄在校正進度表和維護記錄上。日誌和其它記錄形式對實驗室記錄本起到支持和幫助。設備的溫度（水浴，培養箱，滅菌鍋）應有記錄並可以追蹤。
己簽發的SOP及其版本應有清楚的記錄。數據的改變應用單錢劃去並簽上日期和縮寫。初始的數據不應抹去或復蓋。
測試結果應包括初始記數，允許復核者根據最終結果重新計算。數據的分析方法在SOP中應詳細描述。
所有的實驗室記錄應存檔避免遺失，現場中應有正式的記錄保存和查閱程序。
檢驗結果的解釋
微生物試驗結果難以解釋，因為下列原因：
微生物是普遍存在於自然界中的，又存在於通常的環境污染，由人類支配的很多類型的特殊的有機物。
實驗室分析人員在樣品分析和操作中可能引入微生物污染。
微生物可能不是均勻的分布在樣品和環境中。
微生物的分析結果存在相當大的可變性。
因此，從預期結果中獲得的微小的不同是沒有多大意義的。
因為微生物分析的這些特性，實驗分析應非常小心以避免外來的污染，正如本章前面討論的。同樣重要的，從主要微生物觀察考慮，結果必須要解釋。不僅包括假定污染的種類，而且包括葯物成分、輔料或測試環境中存在的有機物。另外，其微生物的生長特性也應該考慮。
當出現的結果與葯典正文或其它建立的質量標准不一致時，就應該進行調查。沒有滿足標准要求的微生物污染，通常有兩個明顯的原因：可能是實驗室的錯誤或是實驗環境產生無效的結果，也可能是產品有一定污染或其它形式的污染使得超出規定的標准或限度。另外一種情況，實驗室操作，在多數情況下，應立即通報。
應該對圍繞結果的所有情況進行全面的評估。所有實驗條件和因應充分考慮，包括數據的漂移，與建立的限度和標准比較。重要的是根據結果的可變性知道觀察的統計意義。
實驗室環境，對現場取樣的保護裝置，測試條件下物料的歷史數據，物料的種類，特別注意物料中微生物的存活和繁殖在調查中應被考慮。另外，與實驗員進行討論，分析中的實際操作可以得到有價值的信息。來決定結果的可靠性和決定採取和措施。如果可以確定得到不一致結果的明確原因，那麼應該採取糾正措施，並記錄問題所在。跟蹤正式批准和執行的糾正措施，並進行仔細的檢查。
如果分析結果是無效的，基於一個可指出的錯誤，必須記錄。實驗室應該有證實測試（再測試）的SOP規定，如果必要，再取樣。關於再取樣，法規和葯典沒有給出分析結果調查的操作

㈤ 給生產車間培訓微生物應講什麼內容

可以結合生產和產品質量安全，講一下微生物的分類和特徵、各類型微生物的生長特性、影響產品質量安全的主要微生物有哪些、各種微生物對生產和產品質量的危害、如何控制生產車間和生產過程的微生物等等。

㈥ 微生物培養記錄

1、觀察時間
2、培養溫度
3、菌落觀察（性狀、顏色），液體培養的話主要記錄顏色（觀察時振盪幾下），一些微生物培養時還要記錄氣味等
4、做生化試驗的話，記錄每個生化試驗的結果

㈦ 微生物實驗室培養基配製記錄與出入庫記錄可不可以整合到一起

微生物的實驗室培養：

1．培養基的概念、種類及營養構成
(1)概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配製出的供其生長繁殖的營養基質。

(3)營養構成：各種培養基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。
2．無菌技術
(1)關鍵：防止外來雜菌的入侵。
(2)具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。
②將用於微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。
③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
(3)消毒和滅菌
消毒 滅菌
概念 使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包芽孢和孢子） 使用強烈的理化因素殺死物體內外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學葯劑消毒法、紫外線消毒法 灼燒滅菌、乾熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象 操作空間、某些液體、雙手等 接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等
3、制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
4、接種方法：平板劃線法和稀釋塗布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並盡量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。
③劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
④等平板凝固後，將平板倒置。
（2）稀釋塗布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋塗布平板法。

㈧ 什麼是微生物培養技術

「微生物的利用」包括「進行微生物的分離和培養」、「測定某種微生物的數量」、「研究培養基對微生物的選擇作用」和「嘗試利用微生物進行發酵來生產特定的產物」四項具體內容標准，按照相關內容標準的要求，結合人教版教材所對應的實驗課題，本文將談談對本專題的教學組織。

1 習得微生物培養的基礎知識和基本技能

本專題涉及三個實驗課題，它們的關系及學習要求如下圖所示。在下圖中，課題1涉及微生物培養的基礎知識和基本的操作技能，是其他兩個課題的基礎，課題2和課題3涉及特定的微生物的分離、計數和鑒定，難度較大，課題2強調選擇性培養基的配製和作用，課題3是在選擇性培養基的基礎上，又相應地增加了鑒別性培養基的知識及其應用。

1.1 配製微生物培養基 配製培養基的基礎知識是培養、觀察和研究微生物的基礎。教學時，可以先展示有菌落生長的培養基平板，給學生以視覺刺激，讓他們體會到要觀察和研究微生物，必須創設一定的條件讓微生物大量快速地繁殖起來，只有形成具有一定特徵的菌落，才能更好地研究微生物。進而向學生提供幾種微生物培養基的配方，讓學生通過比較分析各種配養基配方，明確微生物培養基的基本成分包括：碳源、氮源、無機鹽和水，有些微生物還需要某些特殊的生長因子。然後，依次闡明固體、半固體和液體培養基的用途和配製方法，並結合下面的流程圖概述培養基配製的操作步驟：

組織學生配製微生物培養基時，要向他們講清下列注意事項：（1）溶化瓊脂時要控制火力的大小並不斷攪拌，以免培養基溢出或燒焦；（2）加熱過程中部分水分蒸發，待瓊脂完全溶化後應補加蒸餾水，以保持溶液的濃度；（3）分裝至試管時培養基的高度不要超過試管高度的1/5；（4）一般是培養基先滅菌再倒平板，也可先倒平板,課間再滅菌；（5）冷卻後的平板要倒置，以確保拿放方便，同時避免水分蒸發，以利微生物生長。

1.2 無菌技術操作無菌技術是培養、分離和純化微生物的重要技術手段，也是植物組織培養的關鍵性操作。教學時，要先讓學生正確區分消毒和滅菌這兩個概念，並充分認識無菌操作的重要性；然後，在教師的組織和指導下進行規范、熟練地操作，以便順利完成微生物的培養、分離和純化等實驗。下表是消毒和滅菌的一些常用方法及使用范圍。

定義
常用方法
微生物培養和組培的應用

消毒
使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分菌體,但不傷及活組織
煮沸
玻璃儀器

紫外線
實驗室、操作台、衣物等

酒精溶液
手、外植體等

次氯酸鈉溶液等
外植體

滅菌
使用強烈的理化因素殺死物體內外所有菌體、芽孢和孢子
高壓蒸汽
培養基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等

灼燒
接種環、塗布器等

乾熱
玻璃儀器

1.2.1 接種的方法及作用 微生物接種方法有兩種，一是劃線接種，即用接種環劃線將菌體沾在斜面培養基或平板培養基上。微生物的生長和繁殖迅速，一段時間後，就會在培養基表面形成長滿菌落的細線。劃線法的作用是純化微生物，通過劃線將微生物單個地分離，並最終形成標準的菌落；二是塗布接種，即用塗布器將稀釋菌液均勻地塗布在平板上。一個菌體在培養基平板上形成一個菌落，通過統計菌落數可以計算樣品中的菌體數目。

1.2.2 規范實驗操作 接種過程的無菌操作是微生物實驗的關鍵環節，右圖為劃線接種的操作示意圖，下表列出劃線接種的基本步驟和說明。教學中，要求學生認真領會無菌接種的技術原理，反復練習操步驟作。通過練習達到熟練程度，並培養嚴謹認真的科學精神和一絲不苟的實驗態度。

序列
操作步驟
分析說明

1
將接種環放在火焰上灼燒，直到接種環燒紅
將接種環滅菌，避免污染菌種

2
在火焰旁冷卻接種環，拔除盛有菌液的試管棉塞
避免雜菌污染菌種

3
將試管口通過火焰
灼燒滅菌，防止試管口菌體污染培養基

4
將已冷卻的接種環伸入菌液中，沾取菌液
冷卻接種環可避免殺死菌種

5
將試管口通過火焰，並塞上棉塞
避免試管口雜菌污染菌種

6
左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養基
初步接種。劃破培養基不利於後續的繼續劃線，長出的菌落不標准

7
灼燒接種環，冷卻後從第一區劃線的末端向第二區劃線。重復以上操作，在第三、四、五區劃線。注意不要將最後一區的劃線與第一區相連
從上個區域的末端向下個區域劃線,可逐步分離出單個菌體，從而實現微生物的純化

8
將平板倒置，放入培養箱中培養
倒置平板防止水分蒸發，也方便拿放

1.3 稀釋菌液的意義和操作方法 在單位體積的菌體培養液內，含有的微生物個體數目很多。要對微生物進行分離和計數必須將菌液稀釋，只有在稀釋度足夠高的菌液里，聚集的微生物才能分散成單個細胞。一般將菌液稀釋到10-3～10-7時，接種後可能在培養基平板上形成30～300個左右的菌落，統計的菌落數也比較准確可信。

用移液管和無菌水稀釋微生物菌液是一件要求較高的操作技術，學生需要經過多次練習才能做到盡量地減少誤差。 以土壤為樣品進行稀釋操作的注意事項是：（1）初次稱量的土壤樣品，稀釋後的菌液濃度較大，移液時極容易堵塞移液管或吸入較多的土壤顆粒，應靜置一段時間後再移液，或者用低速離心機離心1分鍾後進行移液；（2）當稀釋倍數大時，在稀釋前一定要震盪試管，充分混合菌液，保證移液操作的准確性；（3）每次移液前一定要注意用無菌水（或蒸餾水）清洗移液管並用氣球吹乾，以保證移走菌液的濃度與試管中的一致。

2.實驗設計能力的訓練

2.1 選擇性培養基的實驗設計 根據功能的不同，培養基分為選擇性

培養基和鑒別性培養基，在「土壤中分解尿素的細菌的分離與計數」的實驗中，先讓學生通過分析和判斷下面的三個培養基配方，真正理解選擇性培養基的含義。然後，啟發學生設計一組用於分離尿素細菌的探究實驗，幫助學生理解選擇性培養基的特性及作用。

組別
培養基類型
是否塗布接種
目的

實驗組
以尿素為唯一氮源的培養基
是
分離尿素細菌

對照組
牛肉膏、蛋白腖培養基
是
判斷該培養基有無選擇性

2.2 鑒別性培養基的實驗設計 在「分解纖維素的微生物的分離」實驗中，要鑒別篩選出來的微生物是不是分解纖維素的微生物，就必須用鑒別性培養基。剛果紅與纖維素等多糖類物質反應形成紅色復合物，添加剛果紅的培養基呈紅色，接種的微生物若能夠分解纖維素，就會在其菌落的周圍形成透明圈。值得注意的，培養基的瓊脂中含有澱粉類物質，產生澱粉酶的微生物在培養基上也會形成透明圈；也有些微生物具有降解剛果紅的能力，培養時間過長，也會在菌落周圍出現透明圈。與分解纖維素形成的透明圈相比，這兩種透明圈小而模糊，因此，本實驗最好先用選擇性培養基篩選分解纖維素的微生物，再配製鑒別性培養基進行「分解纖維素的微生物的分離」的實驗。

3 教學實施的前期准備

3.1提前准備好實驗儀器、設備和葯品 為方便大家提前做好准備，現以人教版教材為例，將本專題所需要的儀器、設備和葯品列表如下：

課題名稱
實驗儀器和設備
實驗試劑或葯品
說明

微生物的實驗室培養
培養皿、試管、錐形瓶、量筒、酒精燈、電子天秤、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、接種環、塗布器、恆溫箱、乾熱滅菌箱、小鐵鏟等

牛肉膏、蛋白腖、氯化鈉、鹽酸、氫氧化鈉、瓊脂等
乾熱滅菌箱能夠迅速地將洗干凈的培養皿和試管烘乾，小鐵鏟用於鏟土

土壤中分解尿素的細菌的分離與計數
除配製牛肉膏蛋白腖培養基所需物質外，增加KH2PO4 、NaHPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、酚紅等

分解纖維素的微生物的分離
除配製牛肉膏蛋白腖培養基所需物質外，增加纖維素、NaNO3、Na2HPO4·7H2O、KH2PO4、KCl、酵母膏、水解酪素、CMC-Na(羧甲基纖維素鈉)、土豆汁、剛果紅等

3.2 做好課時安排及計劃 以下為本專題的三個課題的課題數及其說明。

課題名稱
課時數
說明

微生物的實驗室培養
4
配養基的基本知識及配製方法1；配製培養基及倒平板1；純化大腸桿菌和塗布接種1，觀察分析1

分離土壤中分解尿素的細菌
3
基本原理及實驗設計1；樣品稀釋及塗布接種1；對菌落進行統計及實驗的分析與討論1；在第二和第三課時之間需要間隔2天時間

分解纖維素的微生物的分離
3
基本原理及實驗設計1；樣品稀釋及塗布接種1；對菌落進行統計及實驗的分析與討論1；在第二和第三課時之間需要間隔2天時間

3.3 安排好教學班的實驗順序 微生物實驗涉及較多的實驗儀器，而且實驗時需要課內和課外相結合，如實驗室培養需要學生在課堂上完成兩項重要的操作步驟，一是配製培養基並倒平板；二是接種操作。平板滅菌工作由於需要較長的時間，因此只能由教師在課間完成。為保證每位學生都能親手操作，保證各個教學班能在有限時間內完成實驗任務，教師可採取如下的教學流程和教學安排。

3.4 做好課後的觀察與記錄 配製培養基和接種操作可以在課堂上完成，但接種後的平板放入培養箱中需要培養2～3天，這期間可安排生物科代表或部分小組長進行定期觀察，並做好計錄，以便及時讓其他學生觀察到自己的實驗成果。特別需要說明的是，如果學生不能及時觀察，培養的時間過長，很多菌落就會聯成一片，計數時就無法做到准確有效。

4.實驗中需要注意的安全操作

微生物本身就是危險生物，實驗操作中又涉及到消毒、滅菌和接種等基本環節，因此要對學生進行安全教育，確保學生的安全和實驗的順利進行。一是操作安全，接種時要注意避免手被酒精燈火焰灼傷，接種後要及時提配學生洗手，以防止被微生物感染；二是環境安全，使用後的培養基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境。

㈨ 獸用生物製品制度和記錄

參照下文：

獸用生物製品經營管理辦法

第一條 為了加強獸用生物製品經營管理，保證獸用生物製品質量，根據《獸葯管理條例》，制定本辦法。

第二條 在中華人民共和國境內從事獸用生物製品的分發、經營和監督管理，應當遵守本辦法。

第三條 獸用生物製品分為國家強制免疫計劃所需獸用生物製品（以下簡稱國家強制免疫用生物製品）和非國家強制免疫計劃所需獸用生物製品（以下簡稱非國家強制免疫用生物製品）。

國家強制免疫用生物製品名單由農業部確定並公告。

第四條 農業部負責全國獸用生物製品的監督管理工作。

縣級以上地方人民政府獸醫行政管理部門負責本行政區域內獸用生物製品的監督管理工作。

第五條 國家強制免疫用生物製品由農業部指定的企業生產，依法實行政府采購，省級人民政府獸醫行政管理部門組織分發。

發生重大動物疫情、災情或者其他突發事件時，國家強制免疫用生物製品由農業部統一調用，生產企業不得自行銷售。

農業部對定點生產企業實行動態管理。

第六條 省級人民政府獸醫行政管理部門應當建立國家強制免疫用生物製品儲存、運輸等管理制度。

分發國家強制免疫用生物製品，應當建立真實、完整的分發記錄。分發記錄應當保存至製品有效期滿後2年。

第七條 具備下列條件的養殖場可以向農業部指定的生產企業采購自用的國家強制免疫用生物製品，但應當將采購的品種、生產企業、數量向所在地縣級以上地方人民政府獸醫行政管理部門備案：

（一）具有相應的獸醫技術人員；

（二）具有相應的運輸、儲藏條件；

（三）具有完善的購入驗收、儲藏保管、使用核對等管理制度。

養殖場應當建立真實、完整的采購、使用記錄，並保存至製品有效期滿後2年。

第八條 農業部指定的生產企業只能將國家強制免疫用生物製品銷售給省級人民政府獸醫行政管理部門和符合第七條規定的養殖場，不得向其他單位和個人銷售。

獸用生物製品生產企業可以將本企業生產的非國家強制免疫用生物製品直接銷售給使用者，也可以委託經銷商銷售。

第九條 獸用生物製品生產企業應當建立真實、完整的銷售記錄，應當向購買者提供批簽發證明文件復印件。銷售記錄應當載明產品名稱、產品批號、產品規格、產品數量、生產日期、有效期、收貨單位和地址、發貨日期等內容。

第十條 非國家強制免疫用生物製品經銷商應當依法取得《獸葯經營許可證》和工商營業執照。

前款規定的《獸葯經營許可證》的經營范圍應當載明委託的獸用生物製品生產企業名稱及委託銷售的產品類別等內容。經營范圍發生變化的，經銷商應當辦理變更手續。

第十一條 獸用生物製品生產企業可以自主確定、調整經銷商，並與經銷商簽訂銷售代理合同，明確代理范圍等事項。

第十二條 經銷商只能經營所代理獸用生物製品生產企業生產的獸用生物製品，不得經營未經委託的其他企業生產的獸用生物製品。

經銷商只能將所代理的產品銷售給使用者，不得銷售給其他獸葯經營企業。

未經獸用生物製品生產企業委託，獸葯經營企業不得經營獸用生物製品。

第十三條 養殖戶、養殖場、動物診療機構等使用者采購的或者經政府分發獲得的獸用生物製品只限自用，不得轉手銷售。

第十四條 縣級以上地方人民政府獸醫行政管理部門應當依法加強對獸用生物製品生產、經營企業和使用者監督檢查，發現有違反《獸葯管理條例》和本辦法規定情形的，應當依法做出處理決定或者報告上級獸醫行政管理部門。

第十五條 各級獸醫行政管理部門、獸葯檢驗機構、動物衛生監督機構及其工作人員，不得參與獸用生物製品的生產、經營活動，不得以其名義推薦或者監制、監銷獸用生物製品和進行廣告宣傳。

第十六條 養殖戶、養殖場、動物診療機構等使用者轉手銷售獸用生物製品的，或者獸葯經營者超出《獸葯經營許可證》載明的經營范圍經營獸用生物製品的，屬於無證經營，按照《獸葯管理條例》第五十六條的規定處罰。

第十七條 農業部指定的生產企業違反《獸葯管理條例》和本辦法規定的，取消其國家強制免疫用生物製品的生產資格，並按照《獸葯管理條例》的規定處罰。

第十八條 本辦法所稱獸用生物製品是指以天然或者人工改造的微生物、寄生蟲、生物毒素或者生物組織及代謝產物等為材料，採用生物學、分子生物學或者生物化學、生物工程等相應技術製成的，用於預防、治療、診斷動物疫病或者改變動物生產性能的獸葯。

本辦法所稱非國家強制免疫用生物製品是指農業部確定的強制免疫用生物製品以外的獸用生物製品。

第十九條 進口獸用生物製品的經營管理適用《獸葯進口管理辦法》。

第二十條 本辦法自2007年5月1日起施行。